我提的是大鼠的牙槽骨組織，是用液氮磨的。之前預實驗的時候抽了幾個樣本提出來的濃度都挺好的，有的濃度可以到800ng/ul。正式實驗開始，一次研磨4個，但提出來的濃度越來越低（今天提的直接沒過10ng/ul），現(xiàn)在都已經(jīng)廢了很多樣本了，再這樣下去組織樣本就不夠了！預實驗和現(xiàn)在做的步驟和時間都是一樣的，試劑也是一樣，真的想不到是什么問題了。我的RNA提取步驟是這樣的：

1.將浸泡在RNA保存液中的組織加入含有液氮的研缽（研缽已經(jīng)用DEPC水處理過），研磨成粉末后加入含1ml Trizol的ep管，用移液*吹打混勻，室溫放置10分鐘。

2.12000rpm離心5分鐘，棄沉淀。

3.加入200ul氯仿，用力震蕩20次，室溫放置15min。（每次都能看見明顯的分層）

4.4℃ 12000rpm離心15分鐘。

5.將上層水相（450ul）轉(zhuǎn)移至另一離心管；加入450ul異丙醇，室溫放置30分鐘。

6.4℃離心10分鐘，棄上清（直接傾倒）。

7.加入1ml75%乙醇，用手指彈管底，懸浮沉淀。4℃12000rpm離心5min。（每次我都洗兩遍）

8.室溫干燥4min后加入25ulDEPC處理的水溶解RNA，檢測RNA的濃度。

? 之前預實驗的時候?qū)嶒灢襟E都一樣的，但現(xiàn)在就根本提不出來，希望大神們能幫幫我！謝謝??！